سابقه و هدف: استفاده از شاخصهاي آنتيژنيك انتامباهيستوليتيكا مانند آنتيژن پروتئين غني از سرين انتامباهيستوليتيكا جهت تهيه واكسن، برسي تنوع ژنتيكي و تشخيص قطعي و افتراق آن از انتامبا ديسپار كاربرد بيشتري پيدا كرده است. اين ( SREHP) مطالعه با هدف بيان پروتئين نوتركيب غني از سرين انتامبا هيستوليتيكا به منظور استفاده در كيت تشخيصي الايزا انجام شد. ايزوله ايراني كه قبلاً در پلاسميد SREHP روش بررسي: در اين تحقيق كه يك روش توصيفي از نوع اكتشافي است، ابتدا ژن كلون pET32a جدا گرديد و پس از تخليص از ژل در پلاسميد بياني BamHI كلون شده بود، با استفاده از آنزيم (pBSc) بلواسكريپت و SREHP با پرايمرهاي اختصاصي PCR ، Rosconis با استفاده از محلول (Quick check) شد. از روشهاي غربالگري شامل روش سريع جهت تاييد كلونينگ استفاده شد. ترادف نوكلئوتيدهاي ژن با روش سكوئنسينگ HindIII و BamHI و برش آنزيمي با آنزيمهاي pET انتقال يافت. در نهايت ازكلني حاوي BL21(DE جهت تكثير به سلول پذيراي ( 3 SREHP تعيين گشت و پلاسميد نوتركيب حاوي ژن بررسي گرديد. SDS-PAGE القا و وجود پروتئين نوتركيب برروي ژل IPTG پلاسميد نوتركيب كشت انبوه تهيه شد و پروموتور ژن با ، (Quick check) ساب كلون گرديد و صحت كلونينگ با روشهاي غربالگري سريع pET32a در پلاسميد بياني SREHP يافتهها: ژن تاييد شد. ترادف HindIII و BamHI و برش آنزيمي با آنزيم هاي pET T7 promoter و SREHP با پرايمر هاي اختصاصي PCR در مدت زمان 5 ساعت در IPTG نوكلئوتيدهاي ژن با اندازه 666 نوكلئوتيد تعيين گشت و ژن كلون شده در پلاسميد بياني در حضور موجود (Trx-Tag) محيط كشت ابراز شد. وجود پروتئين نوتركيب غني از سرين انتامبا هيستوليتيكا به انضمام تيوردوكسين مشاهده و مورد تاييد قرار گرفت. SDS-PAGE با وزن ملكولي 44 كيلودالتوني در كنار ماركر برروي ژل pET32a در نتيجهگيري: با توجه به كاربرد زياد پروتئين نوتركيب غني از سرين انتامباهيستوليتيكا در تهيه كيتهاي تشخيصي و تهيه واكسن از با موفقيت بيان شد. (SREHP) آن عليه تك ياخته انتامباهيستوليتيكا، در اين مطالعه پروتئين سرين ريچ
کلید واژگان :انتامبا هيستوليتيكا، پروتئين نوتركيب غني از سرينSREHP
ارزش ریالی : 600000 ریال
با پرداخت الکترونیک