زمینه و هدف: سیاه¬زخم یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل این بیماری باکتری باسیلوس آنتراسیس می¬باشد. آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس برای درمان و واکسن قابل استفاده می باشد. هدف این مطالعه بیان آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس در باکتری E. coli می¬باشد. مواد و روش ها: قطعات ژنی مورد نظر از پلاسمید pXOI تکثیر و با عمل SOEiong PCR قطعه بدست آمده در کلونینگ وکتور همسانه¬سازی گردید و بعد از جداسازی به وکتور pET28a(+) زیرهمسانه¬سازی و به باکتری E.coli سویه BL21(DE3) تراریخت شد. بيان آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس تحت القايIPTG انجام و بعد از تخلیص پروتئین با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی، آنتی¬ژن حاصل در چهار نوبت به موش¬های سوری تزریق شد. آنتی-بادی پلی¬کلونال تولید شده در سرم موش¬ها اندازه¬گیری گردید. یافته ها: آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس کلون شده در وکتور بیانی pET28a(+) به وسیله¬ی PCR، آنالیز آنزیمی و توالی یابی تأیید گردید. پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله SDS-PAGE و لکه¬گذاری وسترن تایید شد. سرم از خون موش جداسازی شد و تیتر آنتی بادی علیه PA تغییر یافته از طریق الایزای غیر مستقیم ارزیابی گردید. نتیجه گیری: پروتئین تولیدی دارای خاصیت مهار کنندگی بالایی برای فاکتورهای بیماریزای LF و EF می باشد. با توجه به شناسایی آنتی ژن PA بوسیله آنتی بادی آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس، می¬توان به¬صورت مجزا، یا ترکیبی با ساير دومن هاي PA در طراحی واکسن و بعنوان دارو برای درمان و پیشگیری بیماری سیاه¬زخم استفاده نمود.
کلید واژگان :آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته، باسیلوس آنتراسیس، پروتئین نوترکیب.
ارزش ریالی : 600000 ریال
با پرداخت الکترونیک